Ativação de NF

Parasitas e Vetores volume 15, Número do artigo: 347 (2022) Citar este artigo

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Foi relatado que a via do NF-κB, um importante componente do sistema de defesa do hospedeiro contra infecções por patógenos, pode ser modulada diferencialmente por diferentes cepas de Toxoplasma gondii, dependendo do polimorfismo da proteína GRA15. A cepa de Toxoplasma recentemente isolada T.gHB1 é uma cepa do tipo 1 (ToxoDB#10), mas apresenta diferentes mecanismos de determinação de virulência em comparação com as cepas clássicas do tipo 1 como RH (ToxoDB#10). Portanto, vale a pena investigar se a cepa T.gHB1 (ToxoDB#10) afeta a via de sinalização do NF-κB do hospedeiro.

Os efeitos do T.gHB1 (ToxoDB # 10) na via do NF-κB do hospedeiro foram investigados em células HEK293T. O produto do gene GRA15 foi analisado por bioinformática, e seu efeito na ativação do NF-κB foi examinado por Western blotting e translocação nuclear de p65. Diferentes truncamentos de T.gHB1 GRA15 foram construídos para mapear os domínios críticos para a ativação do NF-κB.

Demonstramos que a via de sinalização da via NF-κB poderia ser ativada pela recém-identificada cepa T.gHB1 tipo 1 (ToxoDB # 10) de Toxoplasma, enquanto a cepa clássica tipo 1 RH (ToxoDB # 10) não o fez. T.gHB1 GRA15 possui apenas uma região transmembrana com uma região terminal C estendida, que é distinta daquela das cepas clássicas tipo 1 (ToxoDB#10) e tipo 2 (ToxoDB#1). T.gHB1 GRA15 poderia induzir claramente a fosforilação de IκBα e a translocação nuclear de p65. Ensaios duplos de luciferase em células HEK293T revelaram uma necessidade de 194-518 aa de T.gHB1 GRA15 para ativar efetivamente o NF-κB.

Os resultados gerais indicaram que o isolado tipo 1 recém-isolado T.gHB1 (ToxoDB # 10) tinha um GRA15 único, que poderia ativar a sinalização NF-κB do hospedeiro através da indução da fosforilação de IκBα e da translocação nuclear p65. Estes resultados fornecem novos insights para a nossa compreensão da interação entre os parasitas do Toxoplasma e seus hospedeiros.

Toxoplasma gondii é um parasita intracelular obrigatório onipresente que infecta uma ampla gama de animais de sangue quente e humanos [1]. Apesar de um grande número de hospedeiros intermediários, apenas gatos domésticos e outros animais felinos podem servir como hospedeiros definitivos [2]. A infecção humana é geralmente adquirida pela ingestão de carne mal cozida contendo cistos teciduais ou água, frutas ou vegetais contaminados com oocistos [3]. Está estabelecido que 30% da população mundial era soropositiva para toxoplasmose. A infecção por T. gondii é geralmente benigna e assintomática em indivíduos saudáveis. Embora resultados graves e até mesmo a morte possam ocorrer quando a infecção por Toxoplasma ocorre em pessoas com imunidade comprometida ou em receptores de órgãos transplantados [4].

Apesar de sua alta prevalência no mundo, apenas uma espécie do gênero Toxoplasma foi definida [5]. Até agora, mais de 200 genótipos de Toxoplasma foram registrados no banco de dados de T. gondii (//toxodb.org/toxo). A análise de genotipagem mostrou uma rica diversidade genética dentro de cepas em todo o mundo, sugerindo que a distribuição dos genótipos de T. gondii pode variar muito com a localização geográfica [6]. A estrutura populacional do Toxoplasma gondii foi originalmente pensada como consistindo em três linhagens clonais principais (tipos 1, 2 e 3) [7]. Na Europa e na América do Norte, os tipos 2 e 3 são as cepas dominantes (assim como o tipo 12 na América do Norte). Na América do Sul e Central, existem muitas cepas atípicas (não clonais) sem um genótipo claramente dominante [8]. Quando avaliada em camundongos, a virulência de diferentes cepas de T. gondii difere significativamente. As cepas do tipo 1 causam 100% de mortalidade em doses de infecção tão baixas quanto um parasita por camundongo. As cepas dos tipos 2 e 3 causam mortalidade moderada ou nenhuma, dependendo das doses [9]. Um estudo recente mostrou que isolados da América do Norte, Europa, Norte de África e Ásia não eram letais para ratos em baixas doses infecciosas, enquanto isolados da América do Sul eram principalmente letais para ratos [10]. Na China, os isolados de Toxoplasma apresentaram diversidade genética limitada, mas mostraram patogenicidade diversa para camundongos. A análise de genotipagem mostrou que a linhagem chinesa 1 (ToxoDB#9) é classificada como o isolado mais prevalente entre todas as cepas conhecidas [11,12,13].